SCRIPTUM-60 trascrittasi inversa, 50.000 unità
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- Article number BS.57.050
Trascrittasi inversa SCRIPTUM-60
La nostra trascrittasi inversa SCRIPTUM-60 (200 U/µl) è una trascrittasi inversa M-MuLV che genera cDNA in modo rapido e specifico anche ad alte temperature. Grazie a una modifica genetica, l'enzima ha un'eccezionale termostabilità fino a 60°C ed è ideale per la trascrizione inversa di RNA con strutture secondarie estremamente complesse (fino a 10 kb). La nostra trascrittasi inversa SCRIPTUM-60 ha anche un'affinità per l'RNA molto elevata, che la rende ideale per l'uso in saggi con RNA target a bassa concentrazione o geni a bassa copiatura. Grazie alla sua elevata purezza, la trascrittasi inversa SCRIPTUM-60 è ideale anche per il rilevamento di agenti patogeni.
Per ottenere risultati ottimali, offriamo la nostra trascrittasi inversa SCRIPTUM-60 con un tampone specificamente ottimizzato.
Caratteristiche
Eccezionale termostabilità - termostabilità fino a 60°C: Consente la trascrizione inversa di strutture secondarie complesse di RNA.
Elevatissima affinità con l'RNA - Eccellente per l'RNA target a bassa concentrazione o per i geni a bassa copia.
Eccellente purezza - Ideale per il rilevamento di agenti patogeni
Buono a sapersi
Gli acidi nucleici a singolo filamento formano spesso doppi filamenti intramolecolari attraverso legami idrogeno tra sezioni complementari. Ne risultano strutture secondarie con i cosiddetti "steli" (sezioni a doppio filamento appaiate) e "loop" (sezioni a doppio filamento che includono sezioni a singolo filamento). Le strutture secondarie dell'RNA possono assumere varie forme, come le anse a forcina, le anse interne o le anse multiple.
Per analizzare una struttura target di RNA instabile, è necessario prima trascriverla in un cDNA stabile mediante una trascrittasi inversa. Tuttavia, le strutture secondarie complesse dell'RNA rendono impossibile per la trascrittasi inversa attaccarsi all'RNA o leggere le informazioni. Per risolvere le strutture secondarie complesse dell'RNA, è necessario aumentare la temperatura del saggio. Tuttavia, gli enzimi umani iniziano a denaturarsi a 42°C. La nostra trascrittasi inversa SCRIPTUM-60 è stata geneticamente modificata e presenta un'eccezionale termostabilità fino a 60°C, il che significa che anche la trascrizione inversa di strutture secondarie di RNA estremamente complesse non rappresenta più un problema.
Categoria: Enzima
Specifiche: Trascrittasi inversa
Concentrazione: 200 U/µl
Quantità: 10 000 unità
Definizione dell'unità: un'unità è definita come la quantità di enzima necessaria per convertire 1 nmol di dTTP in una forma insolubile in acido.
(entro 10 minuti a 37°C, primer: poli(rA)/oligo(dT))
Organismo di origine: Moloney Murine Leukaemia Virus (M-MuLV)
Organismo di espressione: E.coli
Conservazione: - 20°C (evitare cicli di congelamento/scongelamento!)
1. Come si usa la trascrittasi inversa SCRIPTUM-60?
La nostra trascrittasi inversa SCRIPTUM-60 sintetizza prodotti di cDNA (fino a 10 kb), che possono poi essere amplificati mediante PCR e una Taq polimerasi. Per una RT-qPCR in un solo passaggio, 10-15 U di SCRIPTUM-60 trascrittasi inversa sono adatte per una miscela di reazione di 20 µl. (Non utilizzare più di 10 µl di soluzione enzimatica per applicazioni a valle come la PCR).
Protocollo standard raccomandato:
Componente Miscela di reazione da 20 µl Concentrazione finale
Campione 10 µl RNA totale: 10 pg - 5 µg
Primer (100 µM) 1 µl 5 µM*
Tampone di reazione 5x 4 µl 1x
Miscela di dNTP (10 mM) 0,5 µl 500 µM
Inibitore della RNasi (40 U/µl) 1 µl 200 U
Riempire con acqua priva di RNasi fino a un volume finale di 20 µl.
* Primer Oligo(dT). Per i primer gene-specifici si consiglia una concentrazione finale di primer di 500 nM.
Per il termociclatore, in genere si consiglia di eseguire la trascrizione inversa a 42°C per 15 minuti. Seguita da inattivazione termica per 2-5 minuti a 85°C. Tuttavia, la durata della trascrizione inversa dipende dalla lunghezza del cDNA. Per strutture target lunghe e complesse, prolungare la fase a 30-45 min e aumentare la temperatura a 50°C.