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Blut RNA Mini Kit, 10 Reaktionen

Blut RNA Mini Kit, 10 Reaktionen
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Inhalt: 10 Reaktionen

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Produktinformationen


Der Blut RNA Mini Kit ist ideal für die Isolierung von RNA aus frischem Vollblut oder EDTA- bzw. Citrat-stabilisierten Proben. Unser säulenbasierter Kit beinhält einen Lysepuffer, der für den effizienten Aufschluss von Blutproben optimiert ist und gleichzeitig RNasen inhibiert. Durch integriertes Wegfiltern der DNA gelingt eine Isolierung der RNA, ohne DNA-Verdau, in nur 45-60 min. Unser RNA Mini Kit besitzt eine hervorragende RNA-Bindungskapazität von über 20 µg und erlaubt eine schnelle sowie effektive RNA-Isolierung in höchster Qualität (Ratio A260/A280: 1.7 – 2.0). Ihre Proben können vor der Lyse auch ohne Bedenken für längere Zeit bei -20°C gelagert werden.

Eigenschaften

Schnelle Isolation - In nur 45 - 60 min
Einfache Handhabung - Säulenbasierte RNA-Isolierung 
Hohe Ausbeute - Bindungskapazität > 20 µg RNA (abhängig von Art/Menge des Probenmaterials)
Guter Durchsatz - Geeignet für 0,5 - 1 ml Vollblut
Hohe Reinheit - Ratio A260/A280: 1.7 - 2.0
Hohe Sicherheit - Ohne Verwendung giftiger Substanzen wie Phenol, DTT, beta-Mercaptoethanol

Gut zu wissen

Ursprünglich basierten RNA-Aufreinigungsverfahren auf einer Zwei-Phasen-Extraktion gefolgt von einer Alkoholausfällung der RNA (z.B. Phenol-Chloroform-Isoamylalkohol-Extraktion). Diese Methode verwendet Phenol und Chloroform, um die Zellen zu lysieren. Bei Extraktionen ist es wichtig, dass perfekte Verhältnis zwischen Probe und Extraktionsmittel zu finden. Wenn zu wenig Extraktionsmittel im Verhältnis zur Probe verwendet wird, verschieben sich Ionenstärke und pH-Wert, wodurch die Reinheit der isolierten RNA gesenkt wird. Vollblut besitzt eine höhere Pufferwirkung, weshalb mit herkömmlichen Methoden ebenfalls Verschiebungen des pH-Werts auftreten können und die Isolierung von qualitativ hochwertiger RNA mit hoher Ausbeute schwierig wird. Unser Blut RNA Mini Kit bietet eine schnelle, einfache und effektive Methode zur Isolierung von RNA aus Blut.

Unser Blut RNA Mini Kit beruht auf einer Säulen-basierten Adsorption der RNA ohne Verwendung giftiger Substanzen wie Phenol oder Chloroform. Nach der Lyse des Vollbluts wird genomische DNA durch integriertes Filtrieren entfernt. Ein zusätzlicher DNase-Verdau der DNA ist nicht nötig. Anschließend wird die RNA in einem zweiten Filtrationsschritt reversibel an eine Silika-Zentrifugationssäule gebunden. Durch Waschschritte können hier Kontaminationen entfernt werden. Die Total-RNA wird zuletzt durch RNase-freies Wasser eluiert und kann direkt für downstream-Applikationen, wie z.B. quantitative PCR, eingesetzt werden.

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FAQ

 

1. Nach der Extraktion keine RNA detektiert?

Falls Sie nach der Extraktion keine RNA detektieren können, kann es sein, dass die RNA zu gering konzentriert ist. Wir empfehlen Ihnen entweder die Menge des Ausgangsmaterials zu erhöhen oder die RNA nach der Extraktion zu fällen. Fällen Sie die RNA mit einer 30:1-Mischung aus absolutem Ethanol und 3M NaAcetat. Resuspendieren Sie die RNA, nach einem Waschschritt mit 70%-igem Ethanol, in 5-10 µl RNase freiem Wasser. Danach sollte Ihre RNA-Konzentration hoch genug sein um detektiert werden zu können.

 

2. Das RNA-Pellet haftet nicht an der Tube-Oberfläche?

Nach den Zentrifugationsschritten ist es wichtig das RNA-Pellet vollständig zu trocknen. Falls das RNA-Pellet fest an der Tube-Oberfläche haftet, können Sie das Tube invertiert auf ein Papiertuch stellen und einfach trocknen lassen. Manchmal haftet das RNA-Pellet aber nicht fest an der Tube-Oberfläche. Das ist ganz normal und hat keinen Einfluss auf die Qualität Ihrer RNA. Wir empfehlen Ihnen dann die Stelle Ihres RNA-Pellets von außen auf dem Tube zu markieren und erneut zu zentrifugieren (Wichtig: Drehen Sie das Tube so, dass das RNA-Pellet nach oben zeigt). Wir empfehlen Ihnen den Überstand mit der kleinsten Pipette abzunehmen. Zusätzlich können Sie das Pellet im Heizblock 15 min bei 37°C trocknen. 

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