Proteinase K-pulver

€ 94,90

Inhalt: 200 Milligramm

zzgl. MwSt. zzgl. Versandkosten

Leveringstid 2-5 virkedager

Article number BS20.2501

Proteinase K (200 mg) Lyofilisert, ≥ 30 U/mg; Rekombinant enzym; Uttrykt i Komagataella... mehr

Menü schließen

Produktinformasjon

Proteinase K (200 mg)

Lyofilisert, ≥ 30 U/mg; Rekombinant enzym; Uttrykt i Komagataella phaffii (Pichia pastoris); MW: 28,9 kDa

Synonym(er)

Endopeptidase K, Pro-k, Proteinase K, Proteinase K

Produktbeskrivelse

Vår proteinase K er en uspesifikk serinprotease med svært høy proteolytisk aktivitet (30 U/mg). Enzymet ble uttrykt i Komagataella phaffii (Pichia pastoris) og er fritt for endogene nukleaser (DNAser, RNAser) og exonukleaser. På grunn av den høye effektiviteten i fordøyelsen av native proteiner er proteasen svært godt egnet for isolering av genomisk DNA fra dyrkede celler eller vev (f.eks. musehaler) og for pålitelig inaktivering av endogene nukleaser (DNAser, RNAser) under DNA/RNA-preparering.

Egenskaper

Høy stabilitet i et bredt pH-område (4,0 - 12,5; optimalt ved pH 7,5 - 8,0)

Høy aktivitet ved temperaturer opp til 56 °C og under denaturerende forhold (aktiv i nærvær av SDS, urea og EDTA).

Høy effektivitet ved lav dosering (50-100 µg/ml er tilstrekkelig for de fleste bruksområder)

Godt å vite

Proteinase K skilles ut av kulturer av muggsoppen Tritirachium album og tjener naturlig til soppens keratinfordøyelse ("K") for å dekke dens karbon- og nitrogenbalanse. Proteinase K stabiliseres strukturelt av Ca2+-ioner og spalter fortrinnsvis peptidbindinger av alifatiske, aromatiske eller andre hydrofobe aminosyrer (C-terminalen). I fravær av Ca2+-ioner viser proteinase K en noe redusert aktivitet. Den totale aktiviteten er imidlertid fortsatt høy, og derfor kan proteinase K-fordøyelse også utføres i nærvær av EDTA. Denatureringsmidler som SDS eller urea fungerer som aktivatorer for enzymet. Proteaseaktiviteten hemmes av Hg2+-ioner, DFP, PMSF, fenol, sulfydrylreagenser og trypsin- eller chymotrypsinhemmere.

Du finner eksempler på anvendelse av Proteinase K under FAQ!

Weiterführende Links zu "Proteinase K, 200 mg"

Zurück

Tekniske data

Kategori: Serin-endopeptidase (hydrolase)

EC-nummer: 3.4.21.64

Reaksjonstype: Proteolytisk spalting

Molekylvekt: 28,9 kDa

Opprinnelsesorganisme: Tritirachium album

Uttrykksorganisme: Komagataella phaffii (Pichia pastoris)

Form: Lyofilisat (hvitt pulver)

Renhet: Proteininnhold > 70 %.
DNA-innhold ≤ 10 pg/mg; ≤ 200 pg/ml

Aktivitet: ≥ 30 U/mg (1 U = 1 mAnsonU)

Én U proteinase K hydrolyserer urea-denaturert hemoglobin og produserer fargeekvivalenten til 1 µmol tyrosin per 1 min ved 37 °C og pH 7,5 (Folin & Ciocalteus metode).

Stabilitet: pH 4,0-12,5 (pH-optimum: 7,5 - 8,0); også stabil i nærvær av denatureringsmidler (SDS, urea).
Ca2+-ioner (1-5 mM) beskytter enzymet mot autolyse.

Aktivatorer: SDS, urea (aktivering ved selvfordøyelse er ikke nødvendig).

Inhibitorer: Hg2+-ioner, PMFS, fenol, DFP, trypsin- eller chymotrypsinhemmere, sulfhydrylreagenser.

Termostabilitet: aktiv ved 37-56 °C (optimal aktivering ved 50-55 °C)

Inaktivering: Varmedenaturering ved 75 °C i 20 min.

Oppbevaring: -20 °C

Løseliggjøring: 20 mg/mL: Oppløses i 50 ml destillert vann.
                              20-50 mg/mL: Oppløses i et definert volum i 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalsiumklorid, kalsiumacetat)
                                                      eller 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalsiumklorid, kalsiumacetat).

                              For langtidslagring, tilsett 50 % glyserol

Standard reaksjonsbuffer: Cellelysering: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM CaCl2, 0,5 % SDS
                                              DNA-rensing: 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA, 500 mM NaCl

Sikkerhet: H315 + H319 + H334 + H317 + H335
                     P260 + P280 + P342 + P311

CAS-nummer: 39450-01-6

Zurück

FAQ

1. Hvordan lager jeg en stamløsning av proteinase K?

      20 mg/mL: Løs opp lyofilisatet i 50 ml destillert vann for umiddelbar bruk.
                         Filtrer løsningen sterilt og oppbevar alikvoter ved -20 °C.
20-50 mg/mL: Løs opp lyofilisatet i et definert volum i 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalsiumklorid, kalsiumacetat)
                         eller 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalsiumklorid, kalsiumacetat) for umiddelbar bruk.
                         Filtrer løsningen sterilt og oppbevar den alikvotert ved -20 °C.

                         For langtidslagring, tilsett 50 % glyserol.

2. Til hvilke bruksområder trenger jeg Proteinase K?

Isolering av genomisk DNA fra musehaler:

                        Buffer: 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 1 % SDS.
                        Konsentrasjon: 400 µg/ml protease K
                        Varighet: Over natten
                        Temperatur: 55 °C

Isolering av genomisk DNA fra dyrkede celler:

                        Buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 100 mM EDTA (pH 8,0), 0,5 % SDS, 20 µg/ml DNasefri RNAse
                        Konsentrasjon: 100 µg/ml protease K
                        Varighet: 3 timer
                        Temperatur: 50 °C

Rask isolering av genomisk DNA (PCR-template):

                        Buffer: 67 mM Tris-HCl (pH 8,8), 16,6 mM ammoniumsulfat, 5 mM β-mercaptoetanol, 6,7 mM MgCl2, 6,7 µM EDTA (pH 8,0), 1,7 µM SDS.
                        Konsentrasjon: 50 µg/ml protease K
                        Varighet: 1 time
                        Temperatur: 37 °C

Rensing av mRNA før cDNA-syntese (øker ofte utbyttet):

                        Buffer: 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM NaCl, 10 mM EDTA (pH 8,0), 0,1% SDS
                        Konsentrasjon: 5 µg/ml protease K
                        Varighet: 1-2 timer
                        Temperatur: 37 °C

Rensing av PCR-preparater før kloning:

                        Tilberedning: PCR-preparater + 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 1 % SDS
                        Konsentrasjon: 400 µg/ml protease K
                        Varighet: over natten
                        Temperatur: 55 °C

Rensing av plasmid-DNA før in vitro-transkripsjon:

                        Tilberedning: plasmid-DNA + 21 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 0,5 % SDS
                        Konsentrasjon: 100 µg/ml protease K
                        Varighet: 1 time
                        Temperatur: 37 °C