We are here for you!

Proteinasa K, 1 g

Proteinasa K, 1 g
269,00 € *
Contenido: 1 Gramm

Precios más. IVA legal más gastos de envío

Tiempo de entrega aprox. 5 días

  • BS20.2505
Proteinasa K (1 g) Liofilizado, ≥ 30 U/mg; Enzima recombinante; Expresada en Komagataella...más
Información del producto

Proteinasa K (1 g)

Liofilizado, ≥ 30 U/mg; Enzima recombinante; Expresada en Komagataella phaffii (Pichia pastoris); MW: 28,9 kDa.

Sinónimos

Endopeptidasa K, Pro-k, Proteinasa K

Descripción del producto

Nuestra proteinasa K es una serina proteasa inespecífica con una actividad proteolítica muy elevada (30 U/mg). La enzima fue expresada en Komagataella phaffii (Pichia pastoris) y está libre de nucleasas endógenas (DNAsas, RNAsas) y exonucleasas. Debido a su alta eficacia en la digestión de proteínas nativas, la proteasa es muy adecuada para el aislamiento de ADN genómico a partir de células cultivadas o tejidos (por ejemplo, colas de ratón) y para la inactivación fiable de nucleasas endógenas (ADNsas, ARNsas) durante la preparación de ADN/ARN.

Propiedades

  •     Alta estabilidad en un amplio rango de pH (4,0 - 12,5; óptimo a pH 7,5 - 8,0)
  •     Alta actividad a temperaturas de hasta 56°C y en condiciones desnaturalizantes (activo en presencia de SDS, urea y EDTA)
  •     Alta eficacia a dosis bajas (50-100 µg/ml suficientes para la mayoría de las aplicaciones)

 

Conviene saber

La proteinasa K es secretada por cultivos del hongo moho Tritirachium album y sirve de forma natural a la digestión de la queratina ('K') del hongo para cubrir su balance de carbono y nitrógeno. La proteinasa K está estabilizada estructuralmente por iones Ca2+ y escinde preferentemente enlaces peptídicos de aminoácidos alifáticos, aromáticos u otros aminoácidos hidrófobos (C-terminal). En ausencia de iones Ca2+, la proteinasa K muestra una actividad ligeramente reducida. Sin embargo, la actividad global sigue siendo elevada, por lo que la digestión de la proteinasa K también puede llevarse a cabo en presencia de EDTA. Los agentes desnaturalizantes como el SDS o la urea sirven como activadores de la enzima. La actividad de la proteinasa es inhibida por iones Hg2+, DFP, PMSF, fenol, reactivos sulfhidrilos e inhibidores de tripsina o quimotripsina.

 

Encontrará ejemplos de aplicación de la proteinasa K en Preguntas frecuentes.

Enlaces de continuación a "Proteinasa K, 1 g"
Datos técnicos

Categoría: Serina endopeptidasa (hidrolasa)

Número CE: 3.4.21.64

Tipo de reacción: Corte proteolítico

Peso molecular: 28,9 kDa

Organismo de origen: Tritirachium album

Organismo de expresión: Komagataella phaffii (Pichia pastoris)

Forma: Liofilizado (polvo blanco)

Pureza: Contenido en proteínas > 70%.
                  Contenido de ADN ≤ 10 pg/mg; ≤ 200 pg/ml

Actividad: ≥ 30 U/mg (1 U = 1 mAnsonU).

Una U de proteinasa K hidroliza la hemoglobina desnaturalizada con urea y produce el color equivalente a 1 µmol de tirosina por 1 min a 37°C y pH 7,5 (método de Folin & Ciocalteu)

Estabilidad: pH 4,0-12,5 (pH óptimo: 7,5 - 8,0); también estable en presencia de agentes desnaturalizantes (SDS, urea).
                   Los iones Ca2+ (1-5 mM) protegen la enzima de la autolisis.

Activadores: SDS, urea (no es necesaria la activación por autodigestión).

Inhibidores: Iones Hg2+, PMFS, fenol, DFP, inhibidores de tripsina o quimotripsina, reactivos sulfhidrilo

Termoestabilidad: activo a 37-56°C (activación óptima a 50-55°C)

Inactivación: desnaturalización térmica a 75°C durante 20 min

Conservación: -20°C

Solubilización: 20 mg/mL: Disolver en 50 ml de agua destilada
                              20-50 mg/mL: Disolver en un volumen definido en 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (cloruro de calcio, acetato de calcio)
                                                      o 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (cloruro cálcico, acetato cálcico)

                              Para almacenamiento a largo plazo, añadir glicerol al 50

Tampón de reacción estándar: Lisis celular: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM CaCl2, 0,5% SDS
                                              Purificación de ADN: 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA, 500 mM NaCl

Seguridad: H315 + H319 + H334 + H317 + H335
                     P260 + P280 + P342 + P311

Número CAS: 39450-01-6

FAQ

1. ¿cómo se prepara una solución madre de proteinasa K?

      20 mg/mL: Disolver el liofilizado en 50 ml de agua destilada para uso inmediato.
                         Filtrar la solución estérilmente y almacenar alícuotas a -20°C.
20-50 mg/mL: Disolver el liofilizado en un volumen definido en 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (cloruro cálcico, acetato cálcico)
                         o 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (cloruro de calcio, acetato de calcio) para uso inmediato.
                         Filtrar la solución estéril y almacenar alícuotas a -20°C.

                         Para almacenamiento a largo plazo, añadir glicerol al 50%.

2. ¿para qué aplicaciones necesito proteinasa K?

  •     Aislamiento de ADN genómico de colas de ratón:

                        Tampón: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8.0), 1% SDS
                        Concentración: 400 µg/ml de proteasa K
                        Duración: Durante la noche
                        Temperatura: 55°C

  •     Aislamiento de ADN genómico a partir de células cultivadas:

                        Tampón: 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 100 mM EDTA (pH 8,0), 0,5% SDS, 20 µg/ml ARNasa libre de DNasa
                        Concentración: 100 µg/ml de proteasa K
                        Duración: 3h
                        Temperatura: 50°C

  •     Aislamiento rápido de ADN genómico (molde de PCR):

                        Tampón: 67 mM Tris-HCl (pH 8,8), 16,6 mM sulfato amónico, 5 mM β-mercaptoetanol, 6,7 mM MgCl2, 6,7 µM EDTA (pH 8,0), 1,7 µM SDS.
                        Concentración: 50 µg/ml de proteasa K
                        Duración: 1h
                        Temperatura: 37°C

  •     Purificación del ARNm antes de la síntesis del ADNc (a menudo aumenta el rendimiento):

                        Tampón: 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM NaCl, 10 mM EDTA (pH 8,0), 0,1% SDS
                        Concentración: 5 µg/ml de proteasa K
                        Duración: 1-2h
                        Temperatura: 37°C

  •     Purificación de las preparaciones de PCR antes de la clonación:

                        Preparación: preparaciones PCR + 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 1% SDS
                        Concentración: 400 µg/ml de proteasa K
                        Duración: toda la noche
                        Temperatura: 55°C

  •     Purificación del ADN plasmídico antes de la transcripción in vitro:

                        Preparación: ADN plasmídico + 21 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 0,5% SDS
                        Concentración: 100 µg/ml de proteasa K
                        Duración: 1h
                        Temperatura: 37°C

Proteinasa K, 200 mg Proteinasa K, 200 mg
Article number BS20.2501
Contenido 200 Milligramm
94,90 € *
Solución de proteinasa K, 1 ml Solución de proteinasa K, 1 ml
Article number BS20.2551
Contenido 1 Milliliter
19,90 € *
Solución de proteinasa K, 5 ml Solución de proteinasa K, 5 ml
Article number BS20.2576
Contenido 5 Milliliter
84,90 € *
Últimos vistos
Großes Produktportfolio

Geprüfte Qualität

Kurze Lieferzeit

Kompetente Beratung

Faire Preise