Proteinaza K, 1 g

Kategoria: Endopeptydaza serynowa (hydrolaza)

Numer EC: 3.4.21.64

Typ reakcji: Rozszczepienie proteolityczne

Masa cząsteczkowa: 28,9 kDa

Organizm pochodzenia: Tritirachium album

Organizm ekspresyjny: Komagataella phaffii (Pichia pastoris)

Postać: Liofilizat (biały proszek)

Czystość: Zawartość białka > 70%
                  Zawartość DNA ≤ 10 pg/mg; ≤ 200 pg/ml

Aktywność: ≥ 30 U/mg (1 U = 1 mAnsonU)

Jedna U proteinazy K hydrolizuje hemoglobinę denaturowaną w moczniku i wytwarza barwny odpowiednik 1 µmol tyrozyny na 1 min w 37°C i pH 7,5 (metoda Folina i Ciocalteu).

Stabilność: pH 4,0-12,5 (optymalne pH: 7,5-8,0); stabilny również w obecności środków denaturujących (SDS, mocznik).
                   Jony Ca2+ (1-5 mM) chronią enzym przed autolizą.

Aktywatory: SDS, mocznik (aktywacja przez autodestrukcję nie jest konieczna).

Inhibitory: Jony Hg2+, PMFS, fenol, DFP, inhibitory trypsyny lub chymotrypsyny, odczynniki sulfhydrylowe

Termostabilność: aktywny w 37-56°C (optymalna aktywacja w 50-55°C)

Dezaktywacja: denaturacja termiczna w 75°C przez 20 min.

Przechowywanie: -20°C

Rozpuszczanie: 20 mg/ml: Rozpuścić w 50 ml wody destylowanej.
                              20-50 mg/ml: Rozpuścić w określonej objętości w 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (chlorek wapnia, octan wapnia)
                                                      lub 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (chlorek wapnia, octan wapnia).

                              Do długotrwałego przechowywania dodać 50% glicerolu

Standardowy bufor reakcyjny: liza komórek: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM CaCl2, 0,5% SDS
                                              Oczyszczanie DNA: 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA, 500 mM NaCl

Bezpieczeństwo: H315 + H319 + H334 + H317 + H335
                     P260 + P280 + P342 + P311

Numer CAS: 39450-01-6

1. Jak przygotować roztwór podstawowy proteinazy K?

      20 mg/ml: Rozpuścić liofilizat w 50 ml wody destylowanej do natychmiastowego użycia.
                         Sterylnie przefiltrować roztwór i przechowywać podzieloną porcję w temperaturze -20°C.
20-50 mg/ml: Rozpuścić liofilizat w określonej objętości w 50 mM Tris-HCl (pH 7,5-8,0), 1-5 mM Ca2+ (chlorek wapnia, octan wapnia)
                         lub 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (chlorek wapnia, octan wapnia) do natychmiastowego użycia.
                         Roztwór należy sterylnie przefiltrować i przechowywać w temperaturze -20°C.

                         Do długotrwałego przechowywania dodać 50% glicerolu.

2. Do jakich zastosowań potrzebuję Proteinazy K?

•     Izolacja genomowego DNA z ogonów myszy:

                        Bufor: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8.0), 1% SDS
                        Stężenie: 400 µg/ml proteazy K
                        Czas trwania: przez noc
                        Temperatura: 55°C

•     Izolacja genomowego DNA z hodowanych komórek:

                        Bufor: 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 100 mM EDTA (pH 8,0), 0,5% SDS, 20 µg/ml RNAzy wolnej od DNazy
                        Stężenie: 100 µg/ml proteazy K
                        Czas trwania: 3 godziny
                        Temperatura: 50°C

•     Szybka izolacja genomowego DNA (matryca PCR):

                        Bufor: 67 mM Tris-HCl (pH 8,8), 16,6 mM siarczan amonu, 5 mM β-merkaptoetanol, 6,7 mM MgCl2, 6,7 µM EDTA (pH 8,0), 1,7 µM SDS
                        Stężenie: 50 µg/ml proteazy K
                        Czas trwania: 1h
                        Temperatura: 37°C

•     Oczyszczanie mRNA przed syntezą cDNA (często zwiększa wydajność):

                        Bufor: 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM NaCl, 10 mM EDTA (pH 8,0), 0,1% SDS
                        Stężenie: 5 µg/ml proteazy K
                        Czas trwania: 1-2h
                        Temperatura: 37°C

•     Oczyszczanie preparatów PCR przed klonowaniem:

                        Przygotowanie: preparaty PCR + 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8.0), 1% SDS
                        Stężenie: 400 µg/ml proteazy K
                        Czas trwania: przez noc
                        Temperatura: 55°C

•     Oczyszczanie plazmidowego DNA przed transkrypcją in vitro:

                        Przygotowanie: plazmidowe DNA + 21 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 0,5% SDS
                        Stężenie: 100 µg/ml proteazy K
                        Czas trwania: 1h
                        Temperatura: 37°C

• Datenblatt in einem neuen Fenster öffnen