Proteinase K, 1 g
zzgl. MwSt. zzgl. Versandkosten
Leveranstid 2-5 arbetsdagar
- Article number BS20.2505
Proteinas K (1 g)
Lyofiliserad, ≥ 30 U/mg; Rekombinant enzym; Uttryckt i Komagataella phaffii (Pichia pastoris); MW: 28,9 kDa
Synonym(er)
Endopeptidas K, Pro-k, Proteinas K
Beskrivning av produkten
Vårt proteinas K är ett ospecifikt serinproteas med en mycket hög proteolytisk aktivitet (30 U/mg). Enzymet uttrycktes i Komagataella phaffii (Pichia pastoris) och är fritt från endogena nukleaser (DNAses, RNAses) och exonukleaser. På grund av sin höga effektivitet vid nedbrytning av nativa proteiner är proteaset mycket väl lämpat för isolering av genomiskt DNA från odlade celler eller vävnad (t.ex. mussvansar) och för tillförlitlig inaktivering av endogena nukleaser (DNAses, RNAses) under DNA/RNA-beredning.
Egenskaper
- Hög stabilitet inom ett brett pH-område (4,0 - 12,5; optimalt vid pH 7,5 - 8,0)
- Hög aktivitet vid temperaturer upp till 56°C och under denaturerande förhållanden (aktiv i närvaro av SDS, urea och EDTA)
- Hög effektivitet vid låg dosering (50-100 µg/ml räcker för de flesta tillämpningar)
Bra att veta
Proteinas K utsöndras av kulturer av mögelsvampen Tritirachium album och används naturligt vid svampens keratinspjälkning ("K") för att täcka dess kol- och kvävebalans. Proteinas K stabiliseras strukturellt av Ca2+-joner och klyver företrädesvis peptidbindningar av alifatiska, aromatiska eller andra hydrofoba aminosyror (C-terminal). I frånvaro av Ca2+-joner uppvisar proteinas K en något minskad aktivitet. Den totala aktiviteten förblir dock hög, vilket är anledningen till att proteinas K-digestion också kan utföras i närvaro av EDTA. Denatureringsmedel som SDS eller urea fungerar som aktivatorer för enzymet. Proteasaktiviteten hämmas av Hg2+-joner, DFP, PMSF, fenol, sulphydrylreagenser och trypsin- eller chymotrypsininhibitorer.
Exempel på tillämpningar av Proteinase K hittar du under FAQ!
Kategori: Serin endopeptidas (hydrolas)
EC-nummer: 3.4.21.64
Reaktionstyp: Proteolytisk klyvning
Molekylvikt: 28,9 kDa
Ursprungsorganism: Tritirachium album
Uttrycksorganism: Komagataella phaffii (Pichia pastoris)
Form: Lyofilisat (vitt pulver)
Renhet: Proteinhalt > 70
DNA-innehåll ≤ 10 pg/mg; ≤ 200 pg/ml
Aktivitet: ≥ 30 U/mg (1 U = 1 mAnsonU)
Ett U proteinas K hydrolyserar urea-denaturerat hemoglobin och producerar färg motsvarande 1 µmol tyrosin per 1 min vid 37°C och pH 7,5 (Folin & Ciocalteu's metod)
Stabilitet: pH 4,0-12,5 (pH-optimum: 7,5 - 8,0); även stabil i närvaro av denatureringsmedel (SDS, urea).
Ca2+-joner (1-5 mM) skyddar enzymet från autolys.
Aktiverare: SDS, urea (aktivering genom självdigestion är inte nödvändig)
Inhibitorer: Hg2+-joner, PMFS, fenol, DFP, trypsin- eller chymotrypsininhibitorer, sulfhydrylreagenser
Termostabilitet: aktiv vid 37-56°C (optimal aktivering vid 50-55°C)
Inaktivering: värmedenaturering vid 75°C i 20 min
Förvaring: -20°C
Solubilisering: 20 mg/mL: Löses i 50 ml destillerat vatten
20-50 mg/mL: Löses i en definierad volym i 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalciumklorid, kalciumacetat)
eller 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalciumklorid, kalciumacetat)
För långtidsförvaring, tillsätt 50% glycerol
Standardreaktionsbuffert: Celllys: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM CaCl2, 0,5 % SDS
DNA-rening: 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA, 500 mM NaCl
Säkerhet: H315 + H319 + H334 + H317 + H335
P260 + P280 + P342 + P311
CAS-nummer: 39450-01-6
1. Hur bereder jag en stamlösning av proteinas K?
20 mg/mL: Lös upp lyofilisatet i 50 ml destillerat vatten för omedelbar användning.
Filtrera lösningen sterilt och förvara alikvoter vid -20°C.
20-50 mg/mL: Lös upp lyofilisatet i en definierad volym i 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalciumklorid, kalciumacetat)
eller 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 - 8,0), 1-5 mM Ca2+ (kalciumklorid, kalciumacetat) för omedelbar användning.
Filtrera lösningen sterilt och förvara den som alikvot vid -20°C.
För långtidsförvaring, tillsätt 50% glycerol.
2. För vilka tillämpningar behöver jag proteinas K?
- Isolering av genomiskt DNA från mussvansar:
Buffert: 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 1 % SDS
Koncentration: 400 µg/ml proteas K
Varaktighet: Över natten
Temperatur: 55°C
- Isolering av genomiskt DNA från odlade celler:
Buffert: 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 100 mM EDTA (pH 8,0), 0,5 % SDS, 20 µg/ml DNAS-fri RNAse
Koncentration: 100 µg/ml proteas K
Varaktighet: 3 timmar
Temperatur: 50 °C
- Snabb isolering av genomiskt DNA (PCR-mall):
Buffert: 67 mM Tris-HCl (pH 8,8), 16,6 mM ammoniumsulfat, 5 mM β-mercaptoetanol, 6,7 mM MgCl2, 6,7 µM EDTA (pH 8,0), 1,7 µM SDS
Koncentration: 50 µg/ml proteas K
Varaktighet: 1 timme
Temperatur: 37°C
- Rening av mRNA före cDNA-syntes (ökar ofta utbytet):
Buffert: 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM NaCl, 10 mM EDTA (pH 8,0), 0,1 % SDS
Koncentration: 5 µg/ml proteas K
Varaktighet: 1-2 timmar
Temperatur: 37 °C
- Rening av PCR-preparat före kloning:
Beredning: PCR-preparat + 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 400 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 1 % SDS
Koncentration: 400 µg/ml proteas K
Varaktighet: över natten
Temperatur: 55°C
- Rening av plasmid-DNA före in vitro-transkription:
Beredning: plasmid-DNA + 21 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM NaCl, 5 mM EDTA (pH 8,0), 0,5 % SDS
Koncentration: 100 µg/ml proteas K
Varaktighet: 1 timme
Temperatur: 37 °C
